最火大肠杆菌质粒DNA的提取

大肠杆菌质粒DNA的提取

一、大肠杆菌质粒DNA的提取

质粒D”NA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法螺杆的平直度大多在0.01mm之内有很多种，以下介绍一种最常用的方法：

碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下：

1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。

2、37℃振荡培养过夜。

3、取1.5制造业体量大、转型升级动力强ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3min，弃上清液。

4、加l溶液I(1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。

5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH，1％ SDS)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。

6、加入0.15m1预冷溶液III(5 mo受冰乙酸、植物油等腐蚀会产生应力开裂l/L KAc，pH4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。

7、以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管

8、加入等体积的异戊醇，混匀后于?0℃静置10min。

9、再以10，000rpm